عزل الفطريات الحقلية : Isolation of field fungi

وطرق العزل هنا تختلف باختلاف الجزء النباتي , ومنطقة الاصابة ويمكن عزل الفطريات من النباتات المصابة بعدة طرق :
أ- عزل الفطريات المرضية من النباتات المصابة :
يتم اختيار اوراق نباتية مصابة تظهر عليها أعراض المرض على شكل قرح او اختيار ثمار مصابة بالتعفن بعدها تقطع الأجزاء المصابة الى قطع صغيرة وفي ظروف معقمة بعد ان تغمس عدة مرات بماء معقم توضع (1-3 قطعة) في الطبق الحاوي على الوسط الزرعي وتحضن بدرجة (25-28° م) لمدة (5-7 أيام) بعدها يتم التعرف على العامل المرضي المسبب للإصابة .
ب- عزل الفطريات المترممة من المخلفات النباتية :
يتم أخذ قطعة من السيقان أو الأغصان النباتية الساقطة في التربة أو أوراق النباتات الساقطة في الحقل وتوضع هذه الأجزاء على ورقة ترشيح معقمة لتجف ثم تقطع إلى قطع صغيرة وتوضع (1-3 قطعة) في طبق حاوي على وسط زرعي متصلب ثم يحضن الطبق بدرجة (25-28° م) لمدة (5-7 أيام) بعدها نفحص الفطريات الظاهرة في الطبق .



ج- عزل الفطريات الكامنة في البذور Isolation of seed born fungi
تنتقل الفطريات المرضية من البذور إما على السطح الخارجي للبذرة External او داخل البذرة ولعزل البذرة تحت الغلاف Internal ولعزل الفطريات منها يمكن إتباع الطريقة الآتية :
أ‌- عزل الفطريات من على السطح الخارجي للبذرة :
1- تؤخذ عينة البذور المراد فحصها وتقسم إلى قسمين .
2- القسم الأول يعقم سطحيا بأحد المطهرات أو بمحلول الفاست 10% ثم تزرع البذور على وسط غذائي مثل PDA وذلك بعد غسل البذور بالماء المعقم لإزالة آثار التعقيم السطحي.
3- القسم الآخر من عينة البذور تزرع على نفس الأوساط الغذائية لكن بدون أي تعقيم سطحي او غسل ويجب إجراء جميع العمليات تحت ظروف التعقيم .
4- تحضن الأطباق جميعاً على درجة 25° م لمدة ( 3 – 5 ) ايام مع ملاحظة عمل مكررات لا تقل عن ( 5 ) أطباق لكل نوع على ان يوضع في كل طبق 4 بذور متقابلة تقريبا .
5- تفحص الأطباق بعد فترة التحضين وتحدد الفطريات النامية حول البذور ثم تزرع في مزارع نقية وتشخص .
6- تعتبر الفطريات المعزولة من البذورالمعقمة هي فطريات مرضية pathogenic fungi اما الفطريات المعزولة من البذور غير المعقمة هي فطريات رمية saprophytic fungi .
ب‌- عزل الفطريات من داخل البذور :
1- تعقم عينة البذور المراد فحصها تعقيما سطحيا بواسطة محلول القاصر 10% ثم تغسل بماء معقم لإزالة اثار المطهر .
2- توضع البذور المراد فحصها في وسط PDA بعد كسرها الى نصفين في عدة اطباق مكررات .
3- تحضن الاطباق لمدة (3-5) ايام وعلى درجة حرارة 25°م وبعد فترة التحضين تفحص الاطباق لتحديد انواع الفطريات المعزولة ولتحديد عدد البذور المصابة من غير المصابة .