العصيات Bacilli

العصيات Bacilli
المقدمة
توجد اربعة ذراري هامه طبيا من العصيات الموجبه لصبغة كرام وهي:
العصويات Bacillus
المطثيات Clostridium
الوتديات Corynebacterium
الليستيريات Listeria
حيث يقوم النوعان الاولان بانتاج السبورات. يمكن تميز العصيات من خلال مظهرها بتلوين غرام حيث تكون Bacillus و Clostridium اكثر تلونا واطول مقارنة ب Corynebacterium و Listeria. تكون اشكال Corynebacterium و Listeria باشكال مميزه على شكل حرفي الـ ( L و V ).

Exotoxin Important in Pathogenesis Spore Formation Anaerobic Growth Genus
+ + - Bacillus
+ + + Clostridium
+ - - Corynebacterium
- - - Listeria



العصويات Bacillus
عصيات موجبة الكرام كبيرة ومستقيمة تقع في سلاسل بكتيرية هوائية مكونة للسبورات تنتشر في الهواء والغبار والطبيعة. بعض انواعها متعايشة في التربة والمياه والهواء مثل B. cereus التي تكون مرافقة لبعض حالات التسمم الغذائي و B. subtilis واحياناً تعزل من الانسان في الحالات المميتة اما النوع المرضي والاشد خطرا هو B. anthracis المسبب للجمرة الخبيثة (الجمرة الفحمية) يصيب الحيوانات الاهلة ويسبب تعفن دموي Septicemia مع تضخم في الطحال وينتقل للانسان .
الوصف المزرعي :
B. anthracis
عصيات مربعة النمائيين او محدبة تتجمع في سلاسل بكتيرية في الزروع المختبرية وتقع اما منفردة او مزدوجة في دم الحيوان غير متحركة تكون الكبسول في انسجة الحيوان وعلى منبت المصل وفي منابت البيكربونات . اما سبوراتها فتقع في مركز العصية وهي بيضوية وغير منتفخة ولا تتكون في انسجة الحيوان يظهر السبور بلون احمر داخل الخلية في صبغة Gimsa والخلية ارجوانية ، هوائية ولا هوائية مخيرة ، درجة حرارة النمو 12-45 م ، تظهر على وسط الاكار المغذي مستعمرات رمادية باهته حبيبية دائرية لزجة وذات حاشية متموجة تنمو على جميع الاوساط تقريباً . تحلل الدم جزئياً . تخمر الكلوكوز والسكروز والمالتوز منتجة حامض بدون غاز . تختزل النترات الى نتريت .
B. subtilis
تكون نمو زرعي كثيف ابيض براق متماسك و غشائي، تميل المستعمرات الى الانتشار تشبه B .anthracis لكنها اخضر وارفع وذات نهايات مدورة B. cereus تشبه B. anthracis تتواجد في الحليب المسخن المبرد .
العينات :
احسن نموذج في حالة الجمرة الخبيثة يؤخذ من الاصابة المرضية هو سائل حويصلة غير مفتوحة حول الاصابة الجلدية . ومنه تعمل مسحة جافة بصبغه الكرام او من الشعر او الجلد والانسجة والعظام . اما في حالات الانواع التعايشة فيؤخذ من الهواء او الماء والتربة او الحليب .

الفحص المباشر :
عصيات موجبة الكرام منفردة او مزدوجة او سلاسل .

البكتريا الحركة الكبسولة السبور امراضية الفأر درجة حرارة المثلى تفاعل مع البيض
B. anthracis - + مركزي شديد 35 ضعيف
B. cereus + - مركزي ضعيف 30 +
B. mycoides + - مركزي - 30 +
B. subtilis + - مركزي - 37 -
العصيات Bacilli
المطثيات Clostridium

Clostridium perfringens
موجبة الكرام مولدة للسبورات غير متحركة تسبب مرض الكنكرينا الغازية تحلل كريات الدم كاملا . ويتضح سموم هذه البكتريا خلال مناطق التحلل على وسط الدم الصلب فسم الفا يكون منطقة تحلل غير واظحة خارجية اما سم ثيتا فيظهر منطقة تحلل واضحة داخلية ، لا هوائية مجبرة . تظهر المستعمرات على وسط الغذائي الصلب مستديرة ، معتمة ومحاطة بمنطقة من التحلل الدموي الكامل . تنمو بصورة اسرع في الاوساط الحاوية على الكربوهيدرات مثل الكلوكوز والمالتوز حيث يعتبر الكلوكوز عامل مختزل (جهازها الانزيمي لا يعمل الا تحت ظروف الاختزال) . تخمر الكلوكوز واللاكتوز والسكروز والمالتوز محررة غازا ، لا تنتج الا ندول .صنفت سيرولوجيا الى 5 مجاميع هي A,B,C,D,E, وقد وجد ان :
• مجموعة A تسبب التسمم الغذائي للانسان والكنكرينا الغازية في الانسان والحيوان .
• مجموعة B : تسبب التسمم الغذائي في الحمل
• مجموعة C : تسبب التسمم الغذائي في الانسان
• مجموعة D : تسبب التسمم الغذائي في الانسان
• مجموعة E : تسبب التسمم الغذائي في الحيوان

العينات :
الماء ، التربة ، مياه المجاري ، الاغذية الملوثة .
الفحص المباشر :
موجبة الكرام تظهر عصيات سميكة قصيرة يتراوح طولها بين 3-6 مايكرون.
الوصف المزرعي :
? يخطط وسط (SPS) Sulphite Polymyxin Sulfadiazine المحتوي على سترات الحديدوز و Polymyxin , sodium sulfadiazine ويحضن بدرجة 37 م لمدة 24ساعة لاهوائيا ، تظهر مستعمرات Clostridium سوداء نتيجة اختزال السلفايت وانتاج H2S وبوجود ملح الحديد يترسب كبريتيد الحديد Fes .
? يخطط وسط Willis and hobbs eggyolk ويحضن بدرجة 37م لمدة 24ساعة لاهوائيا حيث تظهر المستعمرات وحولها منطقة معتمة ، حيث تعطي البكتريا انزيم الـ lecithinase الذي يحلل مادتي Glycerophosphatide و Sphingomyeline الى الاحماض الدهنية التي تترسب حول المستعمرة .
? يخطط وسط اكار الدم ويحضن بنفس الظروف ، تتكون مستعمرات معتمة حولها منطقة من التحلل الدموي الكامل (نوع بيتا).
? يزرع على وسط اختزال النترات ، حيث تختزال البكتريا النترات الى نتريت وذلك لاحتوائها على انزيم متخصص ويتم الكشف باضافة حامض Sulfanilic و Nephtholeamine بعد فترة الحضانة فيكون لون احمر نتيجة اختزال النترات NO3 الى نتريت NO2وقد لايظهر ذلك اللون نتيجة تحول النترات الى امونيا فيضاف مسحوق الزنك فلا يظهر أي لون .
? يزرع على وسط حليب اللتموس Litmus Milk وبعد الحضانة يلاحظ مايسمى بالتخمر العاصف Stormy fermentation حيث تتكون خثرة الحليب التي تندفع الى اعلى الانبوبة نتيجة تخمر سكر اللاكتوز وهضم مادة الكازائيين الموجودة في الحليب وتكوين كميات من الغازات التي تدفع الخثرة الى الاعلى .
? تفاعل ناكللر Nagler’s reaction هناك عدد انواع من الـ Clostridium تفرز انزيمات حالة للدهون الفوسفاتية Phospholipase وتسبب عتومة Opacity في منابت مصل الانسان ومح البيض . ولغرض تشخيص Cl. welchii السريع في زرع مباشر يستحضر منبت في صحن بتري مكون من الاكار المهضوم مع 5% من المح (صفار البيض) . يقسم المستنبت الى قسمين متجاورين (يخطط بالقلم الشمع على ظهر الصحن من الخارج) بخط قطري ويضاف الى النصف الاول من المنبت ثلاث قطرات من (المصل المضاد) للبكتريا يفرش جيدا بقضيب زجاجي معقم ويترك ليجف . ثم يفرش سطح المنبت باجمعه بالبكتريا او بافرازات البكتريا (راشح الزرع السائل ان كانت البكتريا مزروعة في وسط سائل) ويحضن المستنبت لا هوائيا بدرجة 37 م .
يلاحظ في القسم الذي لم يضف اليه المصل المضاد نمو مستعمرات البكتريا محاطة باطباق ترسبية معتمة (تفاعل نلكر موجب النتيجه) اما المستعمرات النامية في القسم الذي اضيف اليه المصل المضاد فلا نشاهد أي تغير في المنبت . ومن الافضل اضافة النيومايسين Neomycin الى المستنبت لغرض منع نمو البكتريا السبورية الهوائية وعصيات القولون .

Clostridium botulinum
اخطر العصيات اللاهوائية لكونها المسبب الرئيسي للتسمم الغذائي البوتيوليني Botulism الذي يصيب الانسان والحيوانات البرية والداجنة بسبب تناول المواد الغذائية الحاوية على سموم هذه البكتريا مسببة شلل الاعصاب المحيطة ثم الوفاة في اغلب الحالات وتعتبر سمومها من اقوى السموم البايولوجية المعروفة حيث ان الجرعة المميتة للانسان في الحالات المرضية لهذا السم تتراوح بين 0.1 – 1 مايكرو غرام .
العينات :
دم المريض ، كبد المصاب والغذاء .
الفحص المباشر :
عصيات مستقيمة الى منحنية ذات نهايات مدورة يتراوح طولها2 – 10 مايكرون وعرضها 0.5 - 2 مايكرون ، متحركة باسواط تحيط بالخلية موجبة الكرام مكونة للسبورات البيضوية شبه نهائية .
الوصف المزرعي :
تظهر المستعمرات ذات قطر 3 - 8 ملم معتمة المركز ذات حافات غير منتظمة سطحها رمادي شبه لماع ، تنمو بوجود الملح بتركيز 8 – 10 %.
1- تزرع البكتريا على وسط TPGY المضاف اليه التربسين بتركيز 5 % المعقم بالترشيح
2- ترسب الخلايا بالطرد المركزي بسرعة 4000 دورة/دقيقة لمدة ساعة ثم يمزج 1 - 2 مل من الراسب من حجم متساوي من الكحول الاثيلي النقي في انابيب معقمة وتترك لفترة ساعة بدرجة حرارة الغرفة .
3- تزرع الخلايا في وسط اكار الدم ووسط اكار مح البيض ثم تحضن لا هوائيا بدرجة 30-37م ساعة ثم تفحص المستعمرات .

Clostridium tetani
تسبب مرض الكزاز Tetanus عند تلوث الجروح بها نتيجة تكاثرها وانتاجها لسموم قوية يؤثر السم بصورة خاصة على الجهاز العصبي المركزي فتحدث حالات من التشنج العضلي في منطقة الرقبة والفكوك.
العينات :
افرازات الجروح
الفحص المباشر :
عصيات بحجم 2.5×0.5-0.4 مايكرون ذات نهايات مدورة متحركة بواسطة اسواط محيطية (قليلة الحركة) قطبية السبور دائري وتكون البكتريا على شكل الهراوة موجبة الكرام
الوصف الزرعي :
تظهر مستعمراتها على الوسط الصلب متشعبة ومنتشرة ويبدو مظهر المستعمرة كالزجاج المطحون ولا يمكن ملاحظة التحلل الدموي في المزارع الحديثة ، تخمر الجيلاتين ببطء ويمكن قتل السبورات بتعرضها للماء لمدة 5-15 دقيقة ولكن من الممكن ان تقاوم الحرارة الجافة بدرجة 150م لمدة ساعة .

تستخدم طريقة الزرع الثانوي الوخزي في انبوب زرعي يحتوي على منبت اكار لحم الحصان Horse-Flesh Agar مضاف اليه الكلوكوز بنسبة 1% على ان يحض المستنبت لمدة 2-3 ايام لتشجيع السلالات على تكوين السبورات لا تنمو البكتريا على سطح المستنبت بل يبدو خيط ابيض من نمو البكتريا على امتداد قناة الوخز في المنبت مع اشواك جانبية من نمو بكتيري ممتد من عمود القناة الوخزية واطولها ماتبدو في الجزء العميق من المنبت في قعر الانبوب . حقن حيوانات المختبر جزء من التشخيص المختبري.



الوصف الكيموحيوي :

Cl. tetani Cl. welhii Cl. botulinum
Meat V - D(some)
spores Rb OsT OsT
Lactose - A A
Sucrose - + -
Gelatin D D D
Motility + - +
Milk - AGC D
Nitrate
reduction - + -
Indole + - -
Lecithinase - - -
Hemolysis - - -


C: Clot V : variable D: Digest R: Round A: Acid
St: Subterminal T: Terminal G: Gas O: oral
الطرق المستعملة لحضن البكتريا اللاهوائية :
1- الطرق الفيزياوية : وتتم بوضع الاوساط المعقمة في اسطوانات خاصة ثم تغلق هذه الاسطوانات غلقا محكما وتفرغ من الهواء لتخليص المزروع من الاوكسجين الحر ثم يضع فيها غاز خامل مثل النيتروجين او الهيدروجين تحت ضغط جوي واحد وتكرر عملية الضخ ثلاث مرات ثم توضع الاسطوانة في الحاضنة .
2- الطرق الكيمياوية : حيث تستعمل اوعية خاصة تحتوي على غاز Gas pack الذي يعمل على سحب الاوكسجين وتحرير غاز الهيدروجين وثاني اوكسيد الكربون .
3- باستعمال الاوساط التي تولد ظروف لا هوائية مثل وسط اللحم المطبوخ حيث يحتوي على الحامض الاميني Cystein الذي يعمل على توليد ظروف الاختزال ويمكن استعمال مادة thioglycolate بدلا من مادة الـ Cystein .
4- تنمية البكتريا الهوائية مع البكتريا اللاهوائية .