الفحوصات المصلية

المختبر الرابع
الفحوصات المصليه
Serological Tests

تفاعلات الضد والمستضد Antibody-Antigen Reactions
يشكل تفاعل المستضد بضده النوعي اساس التعرف على الاستجابه المناعيه الخلطيه حيث يستخدم العديد من الطرائق للسماح للضد والمستضد بالارتباط مع بعضهم تحت الظروف الملائمه ومشاهدة النتائج اما بالعين المجرده او بواسطة اجهزه ويطلق على تفاعل الضد بالمستضد بـ (التفاعلات المصليه) نظرا لاستخدام المصل Serum فيها.
يختلف تفاعل المستضد بضده النوعي عن التفاعلات الكيميائيه المعروفه نتيجة لعدم تكون مركب جديد لهذا التفاعل بل يتكون المعقد المناعي ، وان القوه التي تربط الضد بالمستضد تختلف عن تلك التي تساهم في التفاعلات الكيميائيه والمتمثله بالاصره الهيدروجينيه والايونيه واللاقطبيه وغيرها حيث ترتبط المستضدات بالاضداد بواسطة قوى تماسك وتلاصق.

استخدامات التفاعلات المصليه Using of Serological Tests
1. التحقق من وجود مسببات الاصابه (الخمج).
2. يصعب احيانا عزل مسبب الاصابه من المريض ولذلك عند وجود اضداد نوعيه له في مصل المريض يمكن التعرف على مسببات الاصابه.
3. التعرف على بعض المستضدات في الانسجه او المواد السريريه.
4. متابعة تقدم المرض من خلال التعرف على كمية الاضداد في مصل المريض.
5. استخدام الاختبارات المصليه للتعرف على وبائية بعض الامراض.
6. التعرف على الحاله المناعيه للجسم ضد مرض معين.

تجري هذه الاختبارات في الزجاج (في المختبر In Vitro) وتوجد تصاميم اساسيه تعتمد نتائجها على المشاهده ومن اهم هذه الاختبارات :

1- الترسيب Precipitation
2- التلازن Agglutination
3- التعادل Neutralization
4- تثبيت المتمم Complement Fixation
5- استخدام المعلمات الكيمياويه Using of Chemicals Props
6- الاليزا Enzyme Linked Immunoabsorbant assay (ELISA)
A. الترسيب Precipitation
ويدعى كذلك بالانتشار المناعي Immunodiffusion ويمكن اجراء هذا الاختبار في الجلاتين او الهلام ومشاهدة الراسب بشكل خطوط او دوائر ترسيبيه يطلق على هذا التفاعل بـ تفاعل الانتشار المناعي. تعمل حفر في الاكاروز مخلوطه بالاضداد ثم تضاف المستضدات حيث تقرأ نتيجة الفحص من قطر دائرة الترسيب المتكونه بعد فترة حضانه معينه.











B. التلازن Agglutination
يكون المستضد المستخدم في تفاعل التلازن عادة جسيمي كالجراثيم وكريات الدم الحمراء وتكون تجمعات لهذه الجسيمات عند خلطها مع اضدادها النوعيه ويستخدم تفاعل التلازن بكثره عند تشخيص البكتريا او التعرف على عيارية مصل المريض عندما تكون البكتريا المسببه للخمج او عند التعرف على زمر الدم ويمكن اجراء الاختبار على شريحه زجاجيه ورؤية النتائج بعد ثواني معدوده كذلك يمكن اجرائها في انابيب اختبار زجاجيه ، يستخدم تخافيف مضاعفه للمصل واضافة كميه كافيه من عالق المستضد ثم تقرا عيارية المصل في اخر انبوب يعطي نتيجه واضحه وكلما احتوى المصل على كميه اكبر من الاضداد كلما ارتفعت عياريته.





C. التعادل Neutralization
يستخدم للتحري عن وجود فعاليه سميه او وجود فيروس في مستحضر ما، ويصعب اجراء اختبار التعادل في الزجاج باستخدام مستخلص السم او الفيروس لذلك تستخم الحيوانات او الزرع النسيجي، يخلط السم او الفيروس مع المصل اذا احتوى المصل على الاضداد او السم او الفيروس عندئذ لايشاهد اي تاثير لهما على الزرع النسيجي او الحيواني اما اذا لم يحتوي المصل على جزيئات الضد التي تعادل السم فعند اضافة الخليط الى الزرع النسيجي يشاهد علامات تاثير السم او الفيروس مثل موت النسيج او ظهور علامات مرضيه كليه.












D. تثبيت المتمم Complement Fixation
المتمم عباره عن عدد من البروتينات الموجوده في مصل الدم بصوره طبيعيه وتشكل حوالي 15% من نسبة الكلوبيولين ولاتزداد كميتها بالتمنيع. تساهم بروتينات المتمم في تفاعلات الضد والمستضد واكثر الكلوبيولينات المناعيه التي تؤدي الى تثبيت المتمم هي (IgM , IgG) فاذا كان المستضد خليه تكون نتيجة تفاعلها مع الضد النوعي بوجود المتمم هو التحلل التام اما اذا كان المستضد ذاتيا وكان الضد بكميات قليله بحيث لايمكن رؤية المعقد المناعي بالعين المجرده عندئذ يمكن استخدام تثبيت المتمم حيث يستخدم للتحري عن تفاعل الضد والمستضد ويستخدم في هذا التفاعل نظام كاشف يتكون من عالق كريات دم الخراف واضدادها النوعيه حيث يخلط المستضد مع ضده النوعي ثم تضاف كمية المتمم (مصل خنازير غينيا لاحتوائها على نسبه عاليه من بروتينات المتمم) ويحضن الخليط بدرجة حراره ملائمه.
E. استخدام المعلمات الكيمياويه Using Chemicals Props
ترتبط المعلمات الكيمياويه اما مع جزيئة الضد او المستضد قبل بدأ التفاعل ثم يخلط الضد مع المستضد لتكوين المعقد المناعي ويتم الكشف عن التفاعل والتحري عن تلك المعلمات ومن اكثرها استخداما النظائر المشعه والصبغات المتألقه والانزيمات (الخمائر).


F. الاليزا Enzyme Linked Immunoabsorbant assay (ELISA)
ان هذا الفحص بسيط وسريع ويتضمن تحليل ذاتي للنتائج. في هذا الفحص يثبت الضد او المستضد على سطح ما (كجدار الشريحه الدقيقه للعيار Microtiterplate) وتفحص عينة الاختبار بواسظة انزيم معلم بالضد ويعتبر الكاشف الاكثر دقه هو الضد الوحيد النسيله Monoclonal antibody .
ان الطريقه الاكثر شيوعا لهذا الفحص هي (Sandwich assay) حيث ان الضد الوحيد النسيله يثبت على الـ Microtiterplate والتي فيها تخافيف لعينة مصل المريض وذلك للسماح للمستضد بالارتباط الى السطح المرتبط للضد ثم تغسل ، يكشف عن المستضد المرتبط بواسطة ضد ثانوي والذي يعلم بانزيم ثم يغسل مره اخرى كما يتم حضانة الحفر من الماده الاساس لذلك الانزيم وذلك لاجراء التفاعل الانزيمي.