حقن الاجنه

تلقيح أجنة الدجاج لتنمية الفيروسات

Inoculation of chicken embryo for cultivation of animal viruses

تستخدم هذه الطريقة في تنمية ما يقرب من 30 نوع من الفايروسات ومنها فايروس الانفلاونزا Influenza virus ، Smallpox ، Virola ، Vaccina ، Herpes virus.

استخدامات تقنية تلقيح أجنة الدجاج
1. انتاج أعداد كبيرة من الفايروسات.
2. دراسة الشكل الخارجي.
3. عزل الفايروسات من العينات.
4. البحوث في مجال ميكانيكية الاصابة الفايروسية.
5. تحديد فعالية الادوية على الفايروسات.
6. برهنة الاصابة الفايروسية.

مميزات تقنية تلقيح أجنة الدجاج
1. توفرها بكميات غير محدودة.
2. سهولة التعامل معها.
3. تعتبر بيئة طبيعية معقمة.
4. عدم قدرة الجنين على انتاج الاجسام المضادة.

مناطق حقن الفايروسات في البيضة المخصبة
1. Allantoic and aminotic cavities.
2. Yolk sac.
3. Chorioallntoic membrane (CAM).
4. Embryo.




طرق الحقن
تعتمد طرق حقن الاجنة على الغرض من طريقة العمل و كذلك الموقع فعلى سبيل المثال يستخدم CAM لمعايرة الفايروس و دراسة الشكل الخارجي و تشخيص الفايروسات أما الـ Aminotic cavity يستخدم في انتاج كميات كبيرة من الفايروسات لغرض انتاج اللقاحات أو الدراسات الكيميائية.

علامات الاصابة الفايروسية في أجنة الطيور
تتميز الاصابة الفايروسية في أجنة الطيور بواحدة أو أكثر من الظواهر التالية:
1. مشاهدة الظواهر الطبيعية الموضعية مثل البثور والتي تختلف بالشكل والحجم و العتومة.
2. مشاهدة التلازن الدموي.
3. مشاهدة الاجزاء الفايروسية في مادة الجنين بواسطة استخدام انواع مختلفة من المجاهر.
4. تقزم الجنين.
5. موت الجنين.

Signs of growth Virus type Membrane
Pocks on membrane Smallpox
Vaccina (cow pox) CAM
Death
Heamagglutination Herpes simplex
Mumps Yolk sac
Pocks Herpes simplex
Pox virus Chorion
Heamaglutination
death Influenza
Mumps Allantion
Aminion


طريقة العمل

لتلقيح CAM في معظم التجارب المختبرية تستخدم أجنة دجاج بعمر 10 أيام لحقن (على سبيل المثال 0.5 مل من فايروس Vaccina) تتبع الخطوات التالية:
1. يستخدم جهاز الفحص لتحديد حيوية الجنين.
2. يحدد موقع كيس الهواء Air sac و منطقة السطح العلوي التي هي منطقة الاوعية الدموية و تحدد بقلم الرصاص لمنع ثقب التراكيب الداخلية أثناء عملية الحقن.
3. تمسح المنطقة بمحلول الايودين و بعد أن يجف محلول الايودين تمسح المنطقة بكحول 70%,
4. يعمل ثقب في القشرة فوق منطقة الكيس بواسطة ضرب القشرة بآلة أو أداة ثقب حادة وبعد ذلك تدور الآلة الى الامام و الاسفل بين الاصابع حتى تصل منطقة الكيس بحذر دون ان تثقب غشاء الكيس.
5. يخرج الهواء بواسطة قطارة بالضغط عليها و يتم عمل فتحة لتتمكن من حقن المادة داخل الـ CAM .
6. يعاد فحص البيضة مرة أخرى للتأكد من موقع غشاء CAM.
7. تعقم المنطقة بواسطة معقم وتعمل حفرة أو ثقب داخل هذه المنطقة.
8. تحقن 0.5 مل من العالق الفايروسي ثم يغلق الثقب بواسطة شمع معقم ويسجل الاسم و أسم الفايروس و نوع التخفيف.
9. تحضن البيضة بدرجة 37-38 °م لمدة 72 ساعة.
10. يزال الغطاء الشمعي و يشرح بقية الجنين بازالة القشرة المتبقية.
11. توضع جميع المواد الملوثة في بيكر يحوي 50 مل من معقم. يفحص الـ CAM لوجود البثور أو الانتفاخات الموضعية.
12. توضع جميع البيضة و جميع المواد داخل صندوق خاص و توضع في الـ Autoclave.



ملاحظات
• البيوض الحاوية على أجنة هي بيوض معقمة و توضع في الحاضنة لفترة قصيرة بعد وضعها وبذلك يتطور الجنين الى العمر المطلوب.
• لتحديد اذا كان الجنين حي و لتحديد موقع الاوعية الدموية و بقية الاجزاء تفحص بجهاز يسمى Egg candling device .
• الجنين الحي يعمل حركة اهتزازية تلقائية يستجيب للحرارة و شدة الضوء و يمكن ملاحظة الاوعية الدموية الشفافة كما يظهر تطور كبير في نموه و الاوعية الدموية له تكون غير واضحة.