زراعة الفطريات Cultivation of fungi

زراعة الفطريات Cultivation of fungi
تزرع الفطريات على اوساط غذائية Nutrient media او تسمى اوساط زرعية Culture media تختلف هذه الأوساط تبعاً لطبيعة الفطر وتبعاً للغرض من زراعته وتعرف الأوساط الزرعية على انها البيئة الغذائية الملائمة لنمو الكائن الحي الدقيق ( البكتيريا والفطريات ) الذي يحصل على غذائه منها وهذه البيئة تحتوي على الكاربون والنايتروجين والأملاح المختلفة وقد تضاف اليها بعض الفيتامينات اما على هيئة مستخلص نباتي او مواد جاهزة كما تضاف اليها بعض المضادات الحياتية من أجل منع نمو البكتيريا وافساح المجال لنمو الفطر فقط او العكس و من هذه المضادات هي : Cyclohexamide , Chloramphenicol , Ampecilline , Streptomycin .
تقسم الأوساط الغذائية حسب مكوناتها الكيمياوية الى ثلاثة انواع هي:
1- الأوساط الطبيعية Natural media :
وهي عبارة عن مستخلصات طبيعية نباتية او حيوانية معقدة غير معروفة التركيب كماً ونوعاً و تحضر غالباً من الأنسجة النباتية او الحيوانية مثل الثمار والخضروات والبيض والحليب ومستخلصات الخميرة والشعير وسوائل الجسم وغيرها. وتمتاز هذه الأوساط بأنها تماثل في تركيبها الوسط الذي ينمو عليه الفطر في الطبيعة علاوة على احتواءها على الفيتامينات و العناصر الأخرى غير الموجودة في باقي الأوساط, كذلك هي رخيصة الثمن وسهلة التحضير كما ان معظم الفطريات تنمو وتتجرثم جيداً في مثل هذه الأوساط. ومن امثلتها مستخلصات الأجزاء النباتية كالبطاطا والجزر والفاصوليا والشعير والرز وغيرها.
2- الأوساط التركيبية ( المحضرة أو الصناعية ) Synthetic media :
وهي تتكون من مواد كيمياوية عضوية او غير عضوية معروفة التركيب كماً ونوعاً وقد يراعى في مثل هذه الأوساط انها تشابه قدر الأمكان تركيب الأنسجة والأعضاء النباتية التي تنمو عليها الفطريات كما يجب مراعاة المواد المستعملة في تركيب مثل هذه الأوساط وحسب الغرض الذي يستخدم من أجله هذه الأوساط وغالباً ما تستعمل هذه الأوساط في الدراسات العلمية التي يقصد منها تأثير التغذية على نمو الفطر وتجرثمه ومثل هذه الأوساط وسط براون Brown’s media ووسط ريتشارد Richard’s media ووسط زايك دوكس CZapek bvx Agar .
3- الأوساط شبه التركيبية Semi Synthetic media:
وهي خليط من النوعين السابقين وذلك لأحتوائها على واحدة او اكثر من المواد الطبيعية غير معروفة التراكيب بالإضافة إلى مركبات كيماوية معروفة التراكيب الكيماوي لذلك تمتاز باكتسابها ميزات كل من النوعين السابقين وتستخدم في الدراسات الفسلجية للفطريات ومن امثلتها وسط البطاطا والدكستروز Potato Dextrose Agar ويرمز له (PDA) والذي يستخدم بشكل شائع في تنمية أغلب الفطريات وعزلها .
كما تقسم الأوساط الغذائية حسب حالتها الفيزيائية الى ثلاثة انواع هي :
ا-الأوساط ألصلبه Solid media:
وهي نوع من الأنواع الثلاثة السابقة مضافاً اليها مادة الأكار (Agar) والاكار مادة عضوية معقدة التراكيب تستخرج من بعض الطحالب البحرية ويوجد منها عدة انواع تجارية تمتاز فيما بينها بدرجة نقاوتها يضاف الى الأوساط الغذائية لكي يساعد على تصلبها عند درجة حرارة اقل من 45°م ويصبح سائلاً عند الدرجات الحرارية العالية يضاف الى الوسط بنسبة 20 -15% من الوسط اي 20 – 15 غم لكل لتر من الوسط الغذائي. تمتاز الأوساط الصلبة بسهولة الأستعمال والنقل واكتشاف التلوث كما تستخدم بنجاح في عزل وتنقية الفطريات كذلك في حفظ مزارع الفطريات المختلفة كأصول في الثلاجة لفترات طويلة وتحضر هذه الاوساط اما في انابيب اختبار مائلة او عميقة او يصلبها في اطباق بتري .
ب - الاوساط السائله liquid media :
وهي الاوساط المحضره بدون اضافة مادة الاكار لذلك يجب الاحتياط عند نقلها لتفادي وصول الوسط الى السدادات القطنيه ومن فوائد هذه الاوساط انها تسمح بتهوية المزارع ويمكن من وزن الغزل الفطري وتحليل المنتجات الايضيه بسهوله وتستخدم في الدراسات الغذائيه كنقص العناصر الغذائيه والفيتامينات وتاثير اضافتها للفطريات كما تستخدم هذه الاوساط في الدراسات الايضيه الثانويه من قبل الفطريات مثل افراز المضادات الحياتيه والسموم والانزيمات وغيرها وتحضر هذه الاوساط في دوارق مخروطيه مختلفه الحجم وحسب نوع الدراسه .
ج- الأوساط شبه الصلبه .semi solid media :
وهي أوساط ذات قوام جيلاتيني وتحتوي على كميه قليلة من الأكار أو بعض العوامل المصلبه الاخرى كالجيلاتين وتستخدم هذه الاوساط لأغراض خاصه منها دراسة التراكيب التكاثريه المتحركه للفطريات او البكتريا .
نماذج من الأوساط الزرعية الشائعة :
ان جميع الفطريات الغير اجبارية التطفل قد يمكن زراعتها وإكثارها على لأوساط الزرعية . فالوسط الزرعي الصلب عادة ما يكون مفضلا في عمليات العزل Isolation والاكثار Cultivation والتنقية Purification وكما هو معروف ان المصدر الذي يعطي صفة الصلابة الزرعية هو الاكار agar ونستعرض هنا بعض الاوساط الزرعية الشائعة الاستخدام في مختبر الفطريات :


ا- الأوساط الطبيعية Natural Media :
وتشتمل على مواد مشتقة من نواتج طبيعية مثل الحنطة وبقية الحبوب البطاطا وغيرها ومن أهم مكوناتها هي :-
1- وسط أكار مستخلص الشعير Malt extract Agar
* Malt extract 20g
* Agar 15g
* (Distill water 1000 ml (1L
2- وسط أكار الماء Water Agar
* Agar 20g
* Distill water 1000 ml
3- وسط أكار البطاطا Potato Agar
* Potato 200g
*Agar 15-20g
* Distill water 1000 ml


ب- الأوساط الصناعية Synthetic Media :
1- وسط زابك دوكس CZapek Dox Agar
*NaNO3 3g نترات لصوديوم
*K2HPO4 1g فوسفات ثنائي البوتاسيوم
* KCl 0.5g كلوريد البوتاسيوم
MgSO4.7H2O 0.5g * كبريتات المغنسيوم
*FeSO4.7H2O 0.01-0.03g كبريتات الحديدوز
* Sucrose 30g
* Agar 15-20g
* Distilled Water 1000 ml

2- وسط ريتشارد Richards medium
* KNO3 10 g نترات البوتاسيوم
* KH2PO 5g فوسفات البوتاسيوم
* MgSO4.7H2O 2.5g كبريتات المغنيسيوم
*FeCl3 0.02g كلوريد الحديديك
* Sucrose 50 g
* Agar 15-20 g
* Distilled water 1000 ml

ج- الاوساط شبه الصناعية Semi Synthetic Media :
1-وسط أكار البطاطا و الدكستروز Potato Dextrose Agar
* potato extract 200g
*Dextrose 20 g
* Agar 15-20 g
* Distilled water 1000 ml



2- وسط أكار مسحوق الذرة Corn Meal Agar
Corn Meal 20g *
* Peptone 20g
* Dextrose(if desired ) 20 g
*Agar 15_20g
D .w. 1000 ml *



3- وسط سابرويد Sabouraud Media
Peptone 10 g *
Glucose or dextrose or maltose 20 g *
*Agar 20 g
D. water 1000 ml *



طريقة تحضير وسط PDA :
1.تؤخذ درنات البطاطا بمقدارg 200 وتغسل جيدا ثم تقطع الى قطع صغيره وتطبخ في دورق لمدة نصف ساعه مع نصف لتر من الماء المقطر .
2.ترشح البطاطا المسلوقه خلال قطعة قماش شاش .
3.ياخذ الراشح ويضاف له سكر الدكستروز ( 20g ثم يضاف الاكار تدريجيا الى الراشح حتى لا يتكتل الاكار ) .
4.يكمل الحجم الى لتر بإضافة النصف المتبقي من الماء المقطر ثم يضاف مضاد حيوي مثل Chloromphenicol بمقدار 250 ملغم في اللتر الواحد ثم يعقم الوسط بجهاز التعقيم autoclave .