المضادات الحياتية المستعملة بصيغة الدمج2

Antimicrobial drugs used in comination
هناك طريقتين :
1- طريقة رقعة الشطرنج checher board titration
2- طريقة نصف رقعة الشطرنج The half chess board titration

1) طريقة رقعة الشطرنج
هي طريقة كمية يتداخل فيها فعل مضادين حياتيين معا ويتم تعيين MIC بشكل دقيق بطريقة رقعة الشطرنج ويمكن عمل تخافيف المضادين الحياتيين في الوسط السائل حيث يتم اختيار تراكيز كل مضاد بشكل منفرد ثم اختيار خلط تراكيز المضادين معا حيث يكون الدمج الناتج حسب طريقة سير الحصان على رقعة الشطرنج بشكل حرف L مقلوب.

طريقة العمل
في حالة دمج مضادين نفرض احدهما A والاخر B يتم عمل سلسلة من التراكيز المضاعفة تبدأ من الصفر وهو السيطرة ثم تضاعف التراكيز , مثلا لتكن التراكيز من 2 مايكرو غرام الى 128 مايكروغرام للمضادين A و B . ترتب تراكيز المضاد B بشكل افقي بينما المضاد A بشكل عمودي كما هو الحال في الجدول ادناه.

128B 64B 32B 16B 8B 4B 2B
2A - + + + + + 2A 2B 2A
4A - - + + + + 4A 2B 4A
8A - - - + + + 8A 2B 8A
16A - - - - + + 16A 2B 16A
32A - - - - + + 32A 2B 32A
64A - - - - + + 64A 2B 64A
128A - - - - - - 128A 2B 128A
control 128B 64B 32B 16B 8B 4B 2B

حيث يكون الصف الاول الاعلى هو تجربة لتقدير MICللمضاد الاول B اما العمود الاول لليسار هو تجربة لتحديد MIC للمضاد A . واخر انبوبة في الزاوية السفلى اليمنى تمثل السيطرة Control وهي خالية من كلا المضادين .
تضاف كمية مناسبة من الوسط السائل الى انابيب الاختبار المرتبة حسب الرقعة وتلقح بكمية مناسبة ومتساوية من العالق البكتيري ثم تضاف تراكيز المضادات الحياتية كما موضح على الرقعة .تحضن الانابيب بدرجة 37م لمدة 24 ساعة . يلاحظ انبوب السيطرة اولا فاذا كان النمو البكتيري واضحا فننتقل الى الانابيب الاخرى حيث تسجل كثافة النمو في كل انبوبة.
تكون قيمة MIC للدمج Synergic action اقل باربع مرات من قيمة MIC لكلا المضادين, مثلا اذا كانت قيمة MIC للمضاد A هي 16 ولB 64 فان MIC للدمج يساوي 4+16=20مايكروغرام\مل.



2) طريقة نصف رقعة الشطرنج

هذا الاختبار ضروري عندما يراد اختبار اكثر من مضادين خاصة ضد Staphylococcus مثل التهاب الصمامات القلبية.
يستعمل في هذه الطريقة تركيز واحد من كل مضاد حيث يختبر كل تركيز لوحده في تجربة منفصلة ثم يتم اجراء التجربة كاملة لجميع المضادات المستعملة .يمكن استعمال عدد من المضادات ورغم ان النتائج قد تبدو فيما بعد معقدة جدا الا ان ترتيب الانابيب بشكل نصف رقعة الشطرنج يسهل العملية بشكل كبير وان اختبار التركيز المنفرد المستعمل من كل مضاد يجب ان يكون ضمن الحدود المسموح بها والتي لاتسبب اثار جانبية على الانسان.

طريقة العمل
1- في حال استعمال 8 انابيب مثلا, ترتب الانابيب في حامل الانابيب بشكل رقعة شطرنج , الخط الاعلى الافقي يحوي 8 انابيب وكذلك الخط العمودي الى جهة اليمين يحوي 8 انابيب .
2- يستخدم وسط Muller Hinton broth بحجم ثابت 10 مل فرضا وتلقح الانابيب ب 0.1 مل من عالق بكتيري منمى لليلة واحدة بحيث يحوي كل انبوب على نفس الكمية من البكتيريا .
3- ضع 1 مل من اول مضاد الى جميع الانابيب في الصف الاول العلوي .
4- ضع 1 مل من ثاني مضاد الى جميع الانابيب في الصف الثاني.واكمل الباقي بنفس الطريقة.
5- ضع 1 مل من اول مضاد الى جميع الانابيب في العمود الاول عدا الانبوب الاول.
6- ضع 1 مل من ثاني مضاد الى جميع الانابيب في العمود الثاني عدا الانبوب الثاني.واكمل الباقي بنفس الطريقة.وكما موضح في الشكل.
7- تترك الانبوبة في الزاوية العلوية كسيطرة .
8- تلاحظ الانابيب بعد انتهاء فترة الحضن (24 ساعة \37م) وسجل كثافة النمو بشكل + او++ او – وذلك بمقارنة كثافة النمو بكثافة نمو انبوبة السيطرة الخالية من اي مضاد.وتلاحظ المضادات التي يحدث بينها تضاد او تآزر .


Novob Streptom Fusidio Rifam Clinda Erythro Genta Cloxa Control
+ - ++ + ++ ++ - + Cloxa
++ + + - Genta
+ + - - + Erythro
+ Clinda
- Rifam
++ Fusidio
- Streptom
+ Novob